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【簡(jiǎn)單介紹】

【細(xì)胞過濾】 ：清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進(jìn)行高壓滅菌處理。 在超凈臺(tái)內(nèi)打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無(wú)損。  

【詳細(xì)說明】

【小牛血清的處理】 ：市場(chǎng)上出售的小牛血清一般做了滅菌處理，但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理，即通過加熱的方法破壞補(bǔ)體(近來(lái)也有觀點(diǎn)認(rèn)為熱滅活處理是不必要的)。胎牛血清不必滅活。
1.將血清加熱至56℃并保持30 min，其間要不時(shí)輕輕晃動(dòng)，使受熱均勻，防止沉淀析出。
2.處理后的血清貯存于4℃。
3.小牛血清在使用前最好進(jìn)行篩選以掌握血清的質(zhì)量。 
【生長(zhǎng)培養(yǎng)基的配制】 ：除無(wú)血清培養(yǎng)之外，各種合成培養(yǎng)基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。

1.培養(yǎng)基分裝成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞緊瓶口。

2.按如下比例配制：基本培養(yǎng)基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。 按1％體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U／mL和100 μ／mL，。

【凍存細(xì)胞的復(fù)蘇】 ：

1.應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。

2.在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，約5ml左右，然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

【傳代】 ：

1.貼壁細(xì)胞:對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml完全培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。

2.懸浮細(xì)胞:一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

【凍存 】 ：將貼壁細(xì)胞消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以完全培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。